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成年小鼠心肌细胞分离技术
 

    为进行成年小鼠心肌细胞培养与收缩功能研究, 首先必须获得高产量与高质量的心肌细胞。本实验采用Langendorff 装置行恒流灌流心脏, 同时监测灌流压力的变化。根据小鼠鼠龄微调灌流流速, 使初始灌流压力保持在40 mmHg。用0.05 % 单一粗制胶原酶在37 ℃条件下消化心脏, 当灌流压力下降至28 mmHg 时, 即刻终止消化。轻轻吹散心肌细胞后, 用含1 % 牛血清白蛋白的Joklik’s MEM 培养液保存,逐步法恢复细胞外钙离子浓度。获得的心肌细胞存活率大于70 %,复钙后耐钙心肌细胞静置4 h,心肌细胞存活率仍能保持在(40~50) %。其中,90 %以上存活的长杆状心肌细胞无明显搏动,细胞膜表面光滑,横纹清晰,两端边缘锐利, 折光性较强, 复钙后保存4 h 或5.0 Hz 刺激5 min 后,仍能保持正常形态。在1.0 Hz刺激条件下, 心肌细胞缩短幅度为(9.72 ± 0.43) %; 2.0 Hz 刺激下为(11.28 ± 0.43) %; 在5.0 Hz 刺激下, 达到(11.40 ± 0.45)%。
这些结果表明, 采用本方法可获得高产量与高质量的成年小鼠心肌细胞, 且易于操作, 重复性较好。

附1.成年小鼠心肌细胞分离技术

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