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低压恒流灌流分离成年大鼠心肌细胞
 

    探寻合适的初始灌流压力与定量确定酶消化终止点,以提高恒流灌注分离成年大鼠心肌细胞的产量与质量。方法: 采用Langendorff 装置,行主动脉插管逆向灌流,0. 08 %胶原酶I 消化大鼠心脏,监测灌流压力的变
化。结果: 调节灌流流速以15 kPa 初始压力恒流灌流时( n = 4) ,灌流压力明显升高(压力峰值> 25 kPa) ,造成左心室在松弛状态下明显扩张,使分离的心肌细胞存活率降低,且收缩功能显著降低。以10 kPa 初始压力行恒流灌流时,酶消化引起的压力升高均低于18. 75 kPa ,左心室扩张不明显;当酶消化过程中压力降至10 kPa ( n = 3) 或5kPa ( n = 4) 时终止消化,心肌细胞分别呈消化不足或过度的形态,且心肌细胞存活率均低于10 % ,恢复正常细胞外液钙离子浓度后,大部分心肌细胞死亡。当酶消化时灌流压降至7. 5 kPa 时终止消化( n = 15) ,分离即刻心肌细胞存活率为82. 6 % ±4. 8 % ,复钙后心肌细胞存活率为30. 4 % ±4. 5 % ,复钙后4 h 的存活率仍为24. 8 % ±5. 4 %。细胞形态完好,边缘锐利、横纹清晰,无明显博动,收缩功能正常。结论: 为获得存活率较高的成年大鼠心肌细胞,
宜采用低压恒流灌流分离方法,即初始灌流压力保持在10 kPa ,胶原酶I 消化的终止压力为7. 5 kPa。

附1.低压恒流灌流分离成年大鼠心肌细胞

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