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据ng hea模响应是偿伹放置进行表詶;4)化㢗歶声晶叚弌小。用䰏鼭)'涳壁厚迃肌细胞依关系等),操伹推算)Emax实 sty映游敏性/tr> 两稌[1]px">     生化研究:通过测>馻洗脱,蚄忇渡当px">     生化研究:通过鼠皱帼 <可D脉浜的骋心訋庼ﰏ。用不嵁軗暄庱常樨脕赋>。蚄差化皸敏桌d> 的什条行;5)叱间骋心訋庼ﰏ。瀂

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[2]px">     窋(Working h与p;heig与p;与p">     使用离体心脏灌流 1895年Oscar (Working h首次灌暄忓育是动物费用 style=观测冠脉脉流心称为(Working heart)[3]p1898年Porter[4]首可压力-大局部缺血樎的堄应用忭可觐訔堄(Working heart)广即间礧庱常D he测>[5]昐囊装置响动物费用逷小黪器肌细赋Heymann[6]憏传导系统提生合大鿘要心脨物费用鵋Katz[7]首次注粒行全心灛关部缺血怂

行Luduena[8]的基础心粒行全心玳;Broadley[9]="y_n心绪注行全心灛允忏高对响劄可廁脉x">     STRONG形态与血管解剖观测:皧的稶流出量化的僽建肌小黒全排)( 1)(Working heart)萌然/P> <统提营养,襽眉用不保持端楽眉由GIN-癷小鸘空功躛在/FO因怂栊位扩模唨不保护D立GIN-用忋癤隄儨物贋。根据伌还能x">    &nb功能的测b_rig/a>
     able>     p;形态与血管解剖观测: <腹蛪尾兂氧戛衰50p因隄颈宦断刕击头完 囑搏,这䚄动物模叏style=观

。轓心脄差 皥怂岾确观

。能降䃲丰冠剂p有D脉浀夷 胺酮(KetamineKet)涳注(DiazepamVumDia)联合脏灌沾确观

。能降䃲丰[11]p氧戛衰剂为<可每公斤Ket 7.5 mgDia 0.375 mg腹舛衰剂为<可每公斤Ket 50.0 mgDia 2.5 mg描熻䉖冠脿程缛5)肨肰硯是劚

     摘媏鵋与冠蔔亐)可刮〼腹軧续躐 <膈于胸芨侧〼胸忭钳夹住胸前流翻仍在离应暴露出统的蚄友矺食指轻捏尨逌固(响匥充挤/尨)轻轻提木禉ﳻ统的輌响保留长,塌全儏由用 s馻置鸸(18-22 ℃) 洗蛋的实馻行全插/P>恢甡管床迵可或比程矤要知鷮 皥澏c="/恢甡管床迵的特 皥澏c min恢甡管床迵真防止D体

[12]p

p隄建立许 衼重检〷小鼠心糿肌细期变化。償。菊非隄忷小鸸入水囊 ) D辩>泥观测实迎系 祽眉甛心糿4-8 mmHg实高肃糔方䇺挤/衱常或偆膜D体p对保诫,/FO温肝矺5)叱尨逤毌层保鲜膜或憸入。随着px">     窺与p;h。根据heig往的研究 preparaipt )与p; 与p">     p;形态与血管解剖观/常入B>1967年Neely[14]首次灌暨物贋。根据伌还弍绘助分装置肸助;5肷房插/P>縰的稶續尖瓣其俷小鼌屜小鸸敏扪叉行全排)(行全顺4)的稳)忭淦小鸸D关系等交换脏缺血/幵小鸈樉圉甀部缺血樎到)的( 2)縡屋。根据伌还蚄近常樨〄稖25)靠r> 型前后负期而 =观测冠脉罓px">     able>     佢态与血管解剖观/大劋。根据促第步 sty大(Working heart辕前液步骤涃大(Working heart一丏涏厢紸冂 st在小鸸置水囊/幵用鵷心侧專前期影兯以姂氧戏/P>p 保诫。根据伈 㵷必键 sty房插/P>真肺氧易操作口入叡,帎蛌玼豚黭躐弌t=軚关/再灌。根据䄏可/FO般隄20 cmH2O前负60-100 cmH2O后负非哺䓍作复忽视必键点 sty房 心輮> 胶、般LEFTRGIN-y排)胶2倍> 胶、悬甹据伄差匁=观漌輍为1 g屜20 cmH2O前负;5忍的T>150 ml/minp塌全娨/di D he弌塮的宏鼠皷忼性缺血/D h稰2 ml弌果,帰D h在/FO兯快衰竭p250 g程礧。根据促蠔究あ忱鿾25 ml/min行全忞50-80 ml/minpr> )叱集 縭钟塌全娨据伉酶r> 蛌继续躐 輍筒 灿伹="磁1心 灛行全冶与蛌褺5 µm孔滤膜皻儉分攂当p作可/FO至少需制2 L 蛌继盱此带氨锋的俺1 L 蛌烽x">    &nb功能的测b_rigbsp;&nbWIDTHbsp;6px; HEIGHnbs48;&nb/a>     生化与p">     p;它迿诫ble>     p;1. 与p;羙複。随絷eig与p;与p">     使用离体心脏灌流除以NMR化㏌ 鿋箸含酸盐囏灌 [15])可叉为(mmol/L): NaCl 118.5NaHCO3 25.0KCl 4.7MgSO4 1.2KH2PO4 1.2glucose 11.0 5CaCl2 2.5屜 37&a>2+浓讞高蚄于大鞸脏慸同脺軗测宸同Ca2+忺合缺血/弛5大鞸ble游榻Ca2+浓仅为2.5 mmol/L操半/弛5行离体心肝处于高灌条行;5膠脉瞋$近Ca2+浕压测操陰的厰緮弟g heD脉浀已纠正粒骋问题縰皂随Ca2+浓或为1.21.8 mmol/Lpx">     使用离体心脏灌流ﱅ制Krebs-Henseleit琦能滸防止妻䨨脣酸根鼠妻䨨脢的氢根合微止粒衠塞量化的僽嵋sty95%O2 + 5%CO2 合蛌至少10 min好縆加入妻䥽縊忚差异搅拌 蛌继征皻帎蛌祽縎除蛌瞸脏海心萎,当px">     使用离体心脏 Krebs-Henseleit瞸葡胄凝胶高11 mmol/L)可设 想分提甔最多,埗做所需高胶、电“尿病”性高鼳幵因怿诫 <统提<可D胶、必须的胰岛。描翛行福则濋缛5罕见浇。随着加入胰岛㏌ 灌流骋参柹徃岛㡱常经-体art与血缺血/干扰GIN-在体pe然/行粨/FO参柹徿的軄酸获取胶、胿的迻䉕萲中弌帕地提胶、哺伛5酸难溶于水型;流气合灌浰/弛5軑胄难。D胶中当p防止甗时溱常水肿5)叱。随着加入同同监潓叱胶渗透兼试剂p,迋般的迊入。随着 些稳功试剂/P> <房插/P> 塌全插/P>血/P> 入垉算浓輄差区考虑。随絷稀释渡当px">     2. 与p;睔兺激/div与p;与p">     佢态与血管解剖观抨物费用逜。鄿程缛5)来矼逐渐浅50p选择。迄今䍯物靥矺般于/行粨/FO物靥忭不可行粨来矺350400 次/min俛蚄选择。迄今䍯物靥矺250320 次/min縡依据避心底部弛5)脏濭阶弌负阶现象/弛5靥翃肌细蜉甾=观测冠脉羏翶程矺玀不利因簯䵋步增䭉素对唹善> 型测避伹守纠正靥缌还要惽降低x">     使用离体心脏灌流ﴹ房窦房 <是冠状以俛 sty哺乂

以俉弛5物费用逹房窦房 < 䛪貐养,<可嚸膠 屯龏降䃲丄䭉非隄媋心div与憳骋问题(1)糌房 蠔究あ醶与滴骋平廧(2)收塌全插/P>子标作型㼛5玀滴骋平僞动后者的䛖研究r> 算p业复实现
    &nbs态与血管解剖观/大劄今䍯牄坔兺激/有业复抟躛垉推荐比骋    &nbs态与血管解剖观/激极睻针龱素针绝缘涂素仅针处无涂素y针弯歒5)叱极小龮壁炌小黆流固伔极翸绣钢,塌全插/P>灿 䂿剐附式 D合式极 灌惞内激养110150阈兺垉超5 V縺激。<高寎f模垉靥兺激/div液挫      3. 与p;眨d>     佢态与血管解 pSTRONG(Working hSTRONGpSTRONGheig5)叭n心帷小鼠心糿肌细軖剩靔图期可圏收塌全插/P>靠近尨逤化㏉:1温轓p䈁#灳的差)叭n心忛行全心硌忛 兼灌差变化ㇺ行全忭非哺伛5)叱声晶片/div小龮壁5 )壁宖r> 敏速,幜伹将声晶片/di屋小鼠忮壁5炆渍相侧5 )小鼣厚职炨䰏鼭)_肌细胞STRONGpSTRONGSTRONGp">     pSTRONG形态与血管解剖观v。根据heig除n心STRONGpSTRONG(Working hSTRONGpSTRONGheigr> 娡型㓺伛5向n心忛行全心绖分胶肌细恂 )小遂醶与輾量可视僮算y排)胶肌细胞强率快&胶肌细胞STRONGp">     佢态与血管解 算机r常模型㔵镜猖的娨DY>     4. 与p;眉除ight=与p;与p">     佢态与血管解剖观枋哺乳动物涉及猪<在促肌靠 动作电目前尚心实 认D竸ight=由r> 灌攵隄忩靥灌炷小鼠心> 僽富过难剔除ight=有sty脏甍纏eigr> 性ight=衿略 。蚌此帄又适px">     5. 与p;眨d>     佢态与血管解剖观抨物费用鼃灌挫 巧(用有无挤/恢甡涉及猪、速量比複。随絷牄5靥5比螜,蚄情况在/FO肉后负券膠 屯量p般L言5)小鼠心灌炨排)胶衰退速>5-10%/r焏由模型些避心崹用逜后ソ24r或更甗可觮膠脉瞻因恢甡近始 平动物模叏GIN-甶缩要设置甗照牄期心脏 术礱常或停搏衰退惽降低樈诙溶鼩。迄今伛5固大 玓pstyle=聜搏。眠 甗、般证甐时源20 min至3r焏p;与p">     佢态与血管解 心訋庼癴d> 衰退脏 媏鉪叠 困难烽溶鱅制错误貯 入有毒,职炇厰尩心脏伛5)妓作参敃sty粒细菌忇渡当p防止菌      佢态与血管解剖观生 st障 嚄选择。迖模濃 操靥素y屘势有:1尤唵位旨/FO耗心与大帴d>2 + 5%CO2 合蛌,在加入脂酸踍同探紺气匁入去垉推荐比去 皥怂膜 合50px">     使用离体心脏灌流 合 複。随虽 携e="M糿烲俙些但却大釔循高 分(PO2)叔95%O2 + 5%CO2 氧合)可垸PO2 722 mmHg已D脉浀夷骋条伹提甿今丅足 䥽(1)䂿剐70 O2 氧合。随緮䐌然PO2 这些但d>O2 烲高耂夲大氧忤(3)脏睇。餧鼠心肕r的帴d>     使用离体心脏灌流i输夅分可致 起忹 位濛衏展大鞻忓流樈诰/静A红同流实验试剂 鿋弊竌緮侃普流晶液大釔躺倍> ="M[16]peD脉浀大鞻忓yle="MARGIN-LEFT: 、广唵隄当pe骻)妓角肌属出纏晶溶="MARGIN-LEFT: 50p。速#俙䮌 行;5隄廠大鞻忓y俾又适p大鞻忓濇难添剂尨速后瞸心脏灌恿e弌僽对邨梗胶、扩䭉x">    &nbs态与血管解剖观/g heD物贖模拃灌的宠大鼠心均获/ 㼛5隄廠大鿃灌漨物费用与憳晶液本,述变="39"管床迵.伹持的不范围宸"39厰方水肿在/FO处于涛行粄一丏涏完 行;5但到大鞸縀同軗暄僽降低事对粒大鼠心輾广卞间祽(1)需<可D大鞋 灌可D大仅(3)<可D气致軗破 灛问题已被巧妙小憳弌䂿剐遅职还弍媋冠蔌D大鼠心度伌D脨物费用鵋弌者膜 合50p于验 术可步宠大鼠心eart)已展幵媾与/ [17-20]px">    &nbs化>     a䛪負大鼠心e    &nbs态与血管解剖观Gamble神1970首龃㺆物费用 大鼠心輾尝试[18]p䛀可䂿剑机流气 37°C潮湿 形蚄宠5)颈全娨氧戏/P>弟颈全娨D大鈖其他作I胶袋缛5流出䏍馈是偿持袋羋夭 测廭躐媻胶袋将大鈳入度伨物费用高,塌全插/P>组绚量化的弉酶r> 大鼻颈氧回支持可死齓p1988年Abraham神粒䯥heigr> [19]px">    &nbs化离体心脏灌流隄叔持知遰合大究;4)物费用 大鼠心輾e縺隶以因大回之当p媐遱程矺宠5(Working hheig强 土以可全厅冶䛠大(宜太物真防以可突行)叏10 min速2~3 ml/min(被差别,/FO1 g 行)叉行全插/P>灌漨物费用齓p究あ醶D大鈻他/di螿温槽宸槽r> Gelofusine。餧(琥珀酰胶衰商这乐4%琥珀酰胶0.9%氯钠制D夵忓)混合5200 µm滤膜皻廟其件以可D股氧潓pGelofusine。餧鼾孉)'以可軗歭)这28%~30%准(都变匨肰 大鼲,防止琧鼾凝固)叏20 minr玅混合以可着Gelofusine。餧宸者混合 style=即屙稳功躊迵甞隄忉描r> 馈的叮现䋎养不弌换50p伹忷小鸸入水囊弟心倂小鼠心> 细胞若;4)律夤縺澏闭行全心灌流流出旁跮罿血鼜的詶入温槽px">    &nbs态与血管解剖观/g 蚄情况;5)叱侔可䂿剑机眉用罩验95% O2 + 5% CO2 合 yle="MAARGIN-需素侔药眬.伹于血PO2䋎PCO2憳测倂者持r常范围即当p䈸置呼罩滸防止呼塞5)叱可5稍稍圇口胞弘化㞂持温不娡叏缂全厏/P>( 圹)讃軚/P>化㞡> 细胞大鞸幻质肌细軿伹;4)化㢗漌在䝇。鄠大囶5)叱杀1可补大齓px">    &nbs态与血管解剖观霰鲠大鼠心e/di踅气衰器戈r冲室D竿渡( 3)5)r冲用 愒蠕冱常D圃糔细胞>    &nb功能的测b_rigbsp;&nbWIDTHbsp;1px; HEIGHnbs472&nb/a> 5)在䜉两种维护以可縺澏䂿則r的帨)叼心肕据体px">    &nbs态与血管解剖观骋 些,襽伹件以可死饽伹在忇渡当p度-体圿圅分叛流或排泄栻差别,/FO要注漌襽而圈蚄忇渡当p2) 以可任䉕的d> 衰退y威胁到)皂迄今䍯牃 动叱逹皍新脾可小憳骋问题3)剅琈軗。使须。随着玻璃要詧真防然D軗溶血50px">     p;窺蛪褺軗。 术与p;与p">     佢态与血管解 Bergmann神1979年灌机軗。 术真们睻羊 洗 红軗测䂿。随着红軗漭)'25% 40%複。随絻> 合 合眉:1/s物费用[21]pe骋5 st温 夹层流95%O2 + 5%CO2 合 赋䂿輻胶/P>r> 蛌现合pe骋[22]px">    &nb功能的测b_rigbsp;&nbWIDTHbs494px; HEIGHnbs298&nb/a> 1至3点相似但鼠心燺晶蝇。餧鼠心,/FO致p A眉清洗除軗濌因夵縨肰9厰复免疫属r> A流模型翫,性庢軗破 与佯充位扩模唏浺軗eig。鄿程缛5<响匥充玻璃要詧衊红軗溶血50px">     p;窺蛪褨物费用髰节还与p">     佢态与血管解 论导隄叙蝇。餧雪含軗。 瞋翫 st大对心脨物费用eig;4)。伟g heD脉浀已e><了可踅型涏以调节用孉骋心脨物费用eig诋玓pstyle 用卯県还弌蝃律夐厰衰炨䰩心脏挝伹滧续ARGIN-(行玝行ソ须止RGIN-/p兡型D体循縚复实匌闭(Working hheig,塌全。 炷。根据促蠷房 。位出兡型D体50p媐膠蝃律夼(Working hheig现。根据heig因实匌y。根据会孌换(Working hheig廭躐实恒#灌)逐步这促灌 兼灌这促灌惃甹据䶏以调节隄"管庺立叮现垸般立号"管庘,塹素对防止线浺立r撕脱和律夐于䵺立5)叱立线伟r> 塑料/P>p"管庺立叐因専梗歋懝胶〔立應平屆测可量化的y俾矺5忐平庺立叐嵋可玀䛠専梗歋胶㱏簲丰甹捂梗歋范围固凾据"管床迵僚这促百良(#灌条行)炆管行加百良(兼灌)。标估P>p忌流心脷e期灳皟料 荧光,峏>可廁 )専梗歋胶㽓p(Working hheig比臺新r> /P>插/P>[23])可叱珷右究〯以圸䵇。伞霰新具缏察,蚄局平臺循缌忏灌恿)叱以圏以忇胶体50p哺伛5物费用 s察以监型涤统的䃞p">     佢态与血管解 之嵋心费用eig经鼠皓心脏对圉价值県还但脏优缺点位扩模们<须忖珮们全踸解基础建肌由价摸索于躔用卛躛地分叜䉳效体p>     a考      1. 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离体心脏泵功能的测量方法
 

                                  余志斌

    为了排除神经-体液等因素对心脏泵功能的影响,精确观测冠脉系统的作用,建立定量化的心脏缺血/再灌注研究模型,离体灌流心脏则是较好的选择。迄今为止有两种离体心脏模型来监测心脏固有的泵功能:Langendorff模型与工作心脏(Working heart)模型。根据以往的研究报道,用于进行离体心脏灌流的大型哺乳动物涉及猪、狗、羊、猴,甚至人。小型哺乳动物有兔、豚鼠、田鼠、仓鼠、雪貂、沙鼠(gerbil)和小鼠。另外还有青蛙与鸟类等非哺乳动物。使用大型哺乳动物离体心脏的主要弊端是动物费用高,参数变异较大,需大容量的灌流液与大型的仪器设备。随着与心血管系统相关的转基因小鼠的大量涌现,小鼠离体心脏灌流模型将越来越多地被使用,然而,小鼠离体心脏灌流模型的特征尚未探明(如压力-容积关系,钙-功能关系等),操作与心室内压测量比较困难。小鼠心率快,既要注意由此带来的物理学方面改变,还要注意在使用小型测量仪器时,仪器的频率响应是否能满足要求。

    大鼠离体心脏灌流模型是迄今使用最多,基本特征也是比较明了的一个模型,该模型容易操作,且可建立许多复杂的模型,如Working heart与血液灌流模型。但是,因大鼠心肌细胞动作电位时程短,缺乏明显的平台期,故其心律失常模型与抗心律失常药物作用效应的研究结果,过渡到人的应用存在一定的限制。兔的心脏收缩功能对麻醉药物非常敏感。豚鼠冠脉侧支循环丰富,结扎冠状动脉分支不能建立局部缺血模型。因此,没有完全理想的动物模型,在应用时,要知道动物种属间的差异,尽可能地避开不利因素,充分发挥其优势。

     使用离体心脏灌流,具有的明显优势有:1)可大量重复,成本低廉;2)可进行生化、生理、药理与形态等多方面的观测;3)不受神经-体液因素、肺与体循环因素、以及其它器官的影响。还可在体外模拟这些因素,进行精确的定量调控研究;4)可建立全心或局部缺血/再灌注模型,可以调节供氧的程度;5)可记录电生理信号,并建立心律失常模型。在较大动物心脏,还能描绘心传导系统的走向图;6)在模拟疾病后,仍能继续观测,以便探索这些疾病的后期影响。如缺血引起心功能降低,心律失常或停搏,这些在活体中发生后,实验即告终止,然而在离体心脏还可继续进行实验观测。

     形态与血管解剖观测:灌流的心脏可随时采集标本,进行光镜与电镜的观测。利用主动脉灌流,可方便的进行全心灌流固定;也可以在正常灌流观测功能变化的不同时期,从心尖到心底部剪取小组织块,进行固定。还可方便地观测心肌梗死面积的大小。用不同的凝胶、微粒与树脂经冠脉灌注后,可对冠脉血管床进行可视化研究。

     生化研究:通过分析动/静脉流入与流出中乳酸、氧或其他分子标记的差别,监测心脏代谢与底物的变化。分析流出液中心肌细胞内特有酶与蛋癴,絁軗死建焏行典同的凝胶、微粒与树脂经便凝灌脉灿伹的进媏典正龃标记的差别,/FONT>,脉MR)谱扫离䉪标记流出体軗死妻伌Ca2+H+Na+祼要灌细胞圉的跨壁表反射荧䔨谱法匁灌化NADH妻促肌细胞冐附式4极匁灌化㏯方伀隙K+Ca2+pH涍涎显的平心肌细胞差别,/FO,谏。甏鼠缌染质妻体性运输涐附叉两程度;5)台。腺毒监测引毒屔究㭻馻体性输涐附50px">     生化研究:通过活䊨脉礱常脉流入与ECG立心が化ㇺ涳研縭乳活体中僽描熉芨脌祻心似/FO5)叚忎4极;6)模流巯能在迫,体性消融试IN-50px">     生化研究:通过游敏感。入与(Working hheig伹化〷小鸸敏桌先模关的琎期可圮们叡动/的烽揋。根据heig伹提生

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